产品货号:
GS4317
中文名称:
DST交联剂
英文名称:
DST crosslinkers
产品规格:
50mg|250mg
发货周期:
1~3天
产品价格:
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DST是高碘酸盐可切割的同双功能交联剂,含有胺反应性N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯基团。DST通常用于将放射性标记的配体结合到细胞表面的受体上。DST必须先溶于有机溶剂如DMSO或DMF中,然后加入到水相反应混合物中。DST是亲脂性的,膜可渗透的,并且不具有带电基团,这使其能够用于细胞内和膜内蛋白质的共轭作用。
NHS酯能够与多肽N末端和赖氨酸(K)残基侧链上的氨基(-NH2)反应,在pH7~9缓冲液中有效进行,形成稳定的酰胺键并释放N-羟基琥珀酰亚胺。但是NHS酯的水解是一个竞争反应,速度随pH的增加而加快。在稀释的蛋白质溶液中易发生水解,浓缩的蛋白质溶液更有利于酰化反应。
别名 | Disuccinimidyl Tartrate;酒石酸二琥珀酰亚胺 |
分子量 | 344.24 |
纯度 | >95% on TLC |
间隔臂 | 6.4 Å |
反应基团 | NHS ester - homobifunctional cleavable |
溶解性 | 可溶于DMSO或DMF. |
结构式 |
组分 | 50mg | 250mg |
DST交联剂 | 50mg | 250mg |
说明书 | 1份 | 1份 |
保存:4℃,干燥
- DST对湿度敏感。为了避免产品中的水分冷凝,开瓶前必须先平衡至室温。
- 使用前立即准备DST交联剂。NHS-酯部分易水解并变得无活性,因此不要制备用于储存的储备溶液,实验前配制,弃掉所有重构交联剂。
- 使用pH7~9的非胺反应缓冲液,如20mM磷酸钠,0.15M氯化钠的PBS,20mM HEPES,100mM碳酸盐/碳酸氢盐,50mM硼酸盐。避免使用含有胺(如Tris和甘氨酸)的缓冲液,因为胺对反应有竞争性。
- DST中心顺式二醇,可以用0.015M偏高碘酸钠裂解。Tris(1M Tris,pH7.5),甘氨酸或赖氨酸可用于淬灭NHS-酯反应,也可以通过透析或凝胶过滤除去未反应的交联剂。
一、交联蛋白的方法
- 在反应缓冲液中制备蛋白质。如果蛋白质溶液含有Tris或甘氨酸,则需要在反应缓冲液中进行深度透析去除。
- 向蛋白质样品中加入交联剂,如果蛋白质浓度大于5mg/mL,则使用10倍摩尔过量的交联剂。若小于5mg/mL的样品,使用20~50倍摩尔过量的交联剂。建议使用的交联剂终浓度为0.25~5mM。将DST溶于DMSO中(10~25mM),在最终反应中尽可能使用最少量的溶剂(1~10%),减少对蛋白质的不利影响。
- 将反应混合物在室温下孵育30分钟或在冰上孵育2小时。
- 如需要淬灭反应,加入终浓度为20~50mM Tris(pH7.5),在室温下孵育15分钟,然后可以通过透析或凝胶过滤去未反应的交联剂。
二、细胞内交联的方法
- 交联可以在悬浮细胞或培养板中的贴壁细胞上进行。但对于贴壁细胞,交联剂向细胞的所有表面扩散会受到限制,并且交联反应将主要发生在暴露的细胞表面上。
- 磷酸盐缓冲液(PBS):20mM磷酸钠,150mM NaCl。或使用pH7~9的HEPES,碳酸氢盐/碳酸盐/硼酸盐缓冲液替代。
- 在PBS中以约25×106个细胞/ml悬浮细胞。
- 用预冷的PBS洗涤细胞三次以除去含胺的培养基和蛋白质。对于细胞表面相互作用研究,向细胞中加入配体并在4℃下孵育1小时。
- 使用前立即将DST溶于DMSO中(10~25mM)。加入DST溶液至终浓度为1~5mM。
- 室温下孵育30min。在4℃下进行孵育可能会降低DST的活性内化。
- 用终浓度为20~50mM的Tris(pH7.5)淬灭反应,并在室温下孵育15分钟。
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